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    如何避免PCR实验室出现污染,有哪些办法

    发布时间: 2021-11-01  点击次数: 79次
      PCR实验室又叫基因扩增实验室,由于PCR检测因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,因此,如何避免以及处理实验室污染,对PCR人来说是一门必修课。
      
      一、样本间交叉污染:
      
      主要是在采(取)样的过程中,由于取样工具之间的交叉造成污染;或者在核酸提取的过程中,由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。
      
      二、PCR试剂的污染:
      
      主要是在PCR试剂配制过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
      
      三、克隆质粒的污染:
      
      在PCR实验室操作中经常会用到阳性参考品,这些阳性参考品大多数是由某些克隆质粒制作而成,克隆质粒在单位容积内浓度高,不小心使用很容易造成污染。
      
      四、PCR扩增产物污染
      
      这是PCR反应中主要常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳性结果。还有一种容易忽视,可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染,在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,据计算一个气溶胶颗粒可含4.8万拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。
      
      污染消除判断标准:
      
      设计阴性对照组,根据阴性对照确认污染情况。可使用敞开后隔夜放置操作区的阴性对照进行实验(在单独的PCR实验室验证),若连续三天阴性对照没有起跳,则说明污染得到控制,可恢复正常实验。
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